一、ELISA試劑盒選擇試劑

　　選擇質量優良的檢測試劑，嚴格按照試劑說明書進行操作，操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。

　　二、加樣

　　可能原因：

　　1）血清或血漿標本分離不好即進行加樣;

      2）手工操作中，加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時間過長（特別是室內溫度較高時）;

      3）加完標本再加酶試劑時酶濺出孔外。

　　解決辦法：

　　1）ELISA試劑盒標本為血清：將血液先自然存放1-2小時后，再用3000rmp離心15分鐘;標本為血漿：必須使用含抗凝劑的血液標本收集管，采血后必須立即顛倒采血管混合5-10次，放置一段時間后，3000rpm離心15分鐘;若在幾天內檢測，可放在2-8℃冰箱中，若要貯存，則置于-20℃的低溫冰箱內。

      2） 加樣后及時放入孵箱。

      3） 加酶試劑后用吸水紙在酶標板表面輕拭吸干。

      4） 如果采用AT或其他全自動加樣，選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。

      5） 標本較多時，請分批操作。

　　三、 孵育

　　可能原因：

　　1） 孵育時未貼封片或加蓋，使標本或稀釋液蒸發，吸附于孔壁，難于清洗*;

       2） 孵育時間人為延長，導致非特異性結合緊附于反應孔周圍，難以清洗*。

　　解決辦法：

　　1） 貼封片或加蓋;

      2） 按說明步驟嚴格控制操作時間。

　　四、洗板

　　可能原因：

　　1） 采用手工洗板，孔與孔之間液體交叉。

       2） 采用半自動洗板機洗板時，洗液量不足，導致洗板不*;洗板針堵塞，抽吸不*;洗板不暢，導致洗板效果差。

       3） 反應板過多造成洗板等待時間長。

　　解決辦法：

　　1） 保證洗液注滿各孔，洗板針暢通，洗完板后在吸水紙（選擇干凈、無或少塵的吸水材料）上輕輕拍干;

      2） 合理安排，或多用幾臺洗板機。

　　五、ELISA試劑盒顯色

　　可能原因：

　　1） 顯色劑配制后放置時間過長或使用過期顯色劑;

      2） 加顯色劑時濺出孔外造成液體回流。

　　解決辦法：

      1） 顯色劑盡量在臨用前配制，堅持不用過期顯色劑，肉眼可見淺藍色的TMB顯色劑不用;

      2） 加樣時保持顯色劑不外流;

      3） A、B液應避免接觸金屬器械。

　　六、終止

　　可能原因如加終止液時產生較多氣泡，導致假陽性增加。所以在加終止液時應避免產生氣泡。

　　七、讀板

　　如讀板時板底不清潔等。應保證酶標板清潔。所以在整個操作過程中保證酶標板不接觸次氯酸; 盡可能實現ELISA檢測標準自動化，有效提高檢測質量。

　　在實際操作中，除了選擇優良試劑外，必須嚴格按照操作步驟進行操作，同時作好室內質控、室間質評，以嚴謹的工作作風檢測每一份標本，才能保證檢測質量。現在國內已有相當數量的單位擁有全自動酶標儀，這對于實現ELISA標準化檢測、提高檢測質量起到了重要作用。