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                基因組DNA提取方法
                更新時間:2011-03-31 點擊次數:2944

                基因組DNA提取方法

                  制備基因組DNA是進行基因結構和功能研究的重要步驟,通常要求得到的片段的長度不小于100-200kb。在DNA提取過程中應盡量避免使DNA斷裂和降解的各種因素,以保證DNA的完整性,為后續的實驗打下基礎。主要是CTAB方法,其他的方法還有1物理方式:玻璃珠法,超聲波法,研磨法,凍融法。2化學方式:異硫氰酸胍法,堿裂解法3生物方式:酶法。根據核酸分離純化方式的不同有:硅質材料、陰離子交換樹脂等

                試驗步驟:

                1、貼壁細胞用胰酶消化,離心收集。

                2、細胞重懸于冰冷的PBS漂洗一次,離心收集。試驗步驟2再重新作一邊。

                3、加入5mlDNA提取緩沖液,(10mmol/LTris-cl,0.1mol/LEDTA,o.5%SDS),混勻。

                4、加入25ul蛋白酶K,使終濃度達到100ug/ml,混勻,50℃水浴3h,

                5、用等體積的酚抽提一次,2500rpm離心收集水相,用等體積的(酚,氯仿,異戊醇)混合物抽提一次,2500r/min離心收集水相

                6、用等體積的氯仿,異戊醇抽提一次。加入等體積的5mol/L的LiCL,混勻,冰浴,10min.。

                7、2500rpm離心10min.轉上清于一離心管中。加入等體積的異丙醇。室溫10min。

                2500rpm,離心10min。棄上清。

                8、加入0.1倍體積3mol/L乙酸鈉(PH5.2)與2倍體積-20℃預冷無水乙醇。-20℃20min。

                9、12000r/min,室溫離心5min。棄上清。將DNA溶于適量TE中。
                公司主要代理產品:
                試劑盒
                ELISA試劑盒、檢測試劑盒、免疫組化試劑盒、放免試劑盒、分子生物學試劑盒、金標檢測試劑盒、Omega試劑盒、細胞凋亡試劑盒、生化試劑盒。
                各種動物血清:內皮細胞血清、Hyclone、GIBCO胎牛血清。
                抗體:進口原裝抗體、進口分裝抗體、單克隆抗體、多克隆抗體、單標抗體、雙標抗體、多標抗體、一抗、二抗;免疫組化抗體、免疫熒光抗體、流式細胞抗體、免疫細胞化學抗體。
                細胞:*細胞、腫瘤細胞、正常細胞、腫瘤耐藥細胞。
                耗材:細胞培養耗材、普通實驗耗材。
                生化試劑*生化試劑、進口分裝生化試劑。

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